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  淄博齐安化工有限公司

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时间:[2018/3/22]

   利用CNBr—GC法可测定富硒的酵母和蛋白中的三种硒氨基酸—SeMet、SeCyaH和SeCy。其方法是:各取样品三份,第一份加溴化氰, GC 测得结果为SeMet的含量;第二份甲基化后加溴化氰,GC测得为 SeMet 和 SeCysH 的总量,用差减法求出 SeCysH 的含量;第三份经还原、甲基化后加溴化氰,GC测得结果为 SeMet 、SeCysH 和 SeCys的总量,用差减法即可求出 SeCys的含量。测定结果见表1。

表1 硒酵母和硒蛋白中硒氨基酸的测定

  由表1可见,硒酵母中硒氨基酸(包括游离态和结合态)的 Se 占总 Se 的百分之五十。而硒蛋白中的硒氨基酸(结合态)的 Se 占总 Se 的百分之五十四左右,其余约百分之五十的硒不能用 溴化氰—GC 法测定,它们以何种形态存在现尚不明,有待进一步探索。

  用 CNBr—GC 法测定生物体中硒氨基酸,样品无需水解,操作简便,方法的检测限为 4x10^-5g SeCys(相当于1.9xl0^-3g Se),灵敏度不高,约 lxl0^-5 Se/mL,仅适于富硒样品中徽量硒氨基酸的测定。对生物体中痕量(lO^-5g Se/ml 以下)硒氨基酸的测定,虽可加大进样量,如由1μL 增加到 l0μL,但溶挤(尤其 CHCl3)峰干扰严重。而加热浓缩时,CH3SeCN 峰会随浓缩而变,但不呈线性(可能受热分解影响),无法定量。

  为检测生物体内痕量硒氨基酸,我们建立了另一种间接测定法一将用前述方法生成的 CH3SeCN 经酸消化为 Se ( IV ) ,然后与 2,3-二氨基蔡(DAN)反应,生成的 4,5—苯并柸硒脑可用电子捕获检测器 ( ECD )检侧或用荧光法检测,我们称之为溴化氰-坯硒脑-GC 法或荧光法。方法的检测限为 7.0xl0^-9g SeCys,比溴化氰-GC 法灵敏度高,适于生物样品痕量游离态于结合态 SeCysH和SeCys的测定,但操作麻烦、费时。

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