从电泳结果(图1)可以看出,当溴化氰与Met的摩尔数比较低时(50∶1)切割效率很低,当比例为250∶1时有较高的切割效率,但继续增加比例切割效果没有明显变化。
而盐酸浓度及不同溶剂对切割效率的影响为:
从电泳结果(图2)可以看出,在8 mol/L尿素溶液(含0.1 mol/L HCl),8 mol/L尿素溶液(含1 mol/LHCl)中都出现了目的肽段(Mr2 200处)且盐酸浓度越高切割效率越高,而在8 mol/L尿素溶液中切割效率极低。
M.低Mr蛋白标准:
(1)溴化氰在8mol/L尿素溶液的条件下裂解包涵体的结果;
(2)溴化氰在8mol/L尿素溶液(含0.1mol/L HCl)的条件下裂解包涵体的结果;
(3)溴化氰在8mol/L尿素溶液(含1mol/L HCl)的条件下裂解包涵体的结果;
(4)溴化氰在百分之七十甲酸的条件下裂解包涵体的结果。
在百分之七十甲酸中虽然融合蛋白被切割但是肽段切割不完全,没有切割出目的肽段(可能是G13与前面含有7个氨基酸的阴离子肽段之间的Met没有被切割),说明高效率的溴化氰切割需要在酸性条件下进行,且溴化氰在促溶剂(尿素)的酸溶液中切割融合蛋白比在百分之七十甲酸中切割的更完全,更有利于小肽切割。