首先,加入不同量的溴化氰切割包涵体。
每10毫升菌液生成的包涵体用8mol/L尿素溶液(含0.1mol/L 氯化氢)1 mL溶解,4摄氏度,12000 r/min离心15分钟,上清即为包涵体溶解液。将溴化氰溶于乙腈,配成200 mg/mL的溶液(使用时现配),再将溴化氰溶液加入到包涵体溶解液中,每管中溴化氰的摩尔数:Met(甲硫氨酸)的摩尔数分别为50∶1,250∶1,1 250∶1。
振荡混匀,避光室温裂解一天后,加入1倍体积的ddH2O灭活溴化氰,反应完成后所使用过的器皿均要用硫酸亚铁进行处理,取样进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析切割效果。
其次,在不同酸浓度及溶剂条件下切割包涵体
每10 mL菌液生成的包涵体分别用8 mol/L尿素溶液,8 mol/L尿素溶液(含0.1 mol/L 氯化氢),8 mol/L尿素溶液(含1 mol/L H氯化氢),百分之七十甲酸溶解,离心后,加入相同量的溴化氰,按上面的操作,反应完成后取样进行Tricine-SDS-PAGE电泳。