溴化氰C末端胶内裂解情况如下:
首先将样品按常规方法进行SDS-PAGE分离,根据相对分子质量信息选择目的重组蛋白药物条带切成细小颗粒;
然后用50mol·L-1NH4HCO3与乙腈1:1混合,取约50μL加入胶粒中,震荡静置,至胶粒无色,乙腈脱水干燥;
1.54mgDTT用50mol·L-1NH4HCO3配制成终浓度为10mol·L-1的溶液,加入20μLDTT溶液(盖住胶粒),56摄氏度孵化半小时;
然后将10.2毫克碘乙酰胺50mol·L-1NH4HCO3配制成终浓度为55mol·L-1溶液,避光25摄氏度放置半小时进行还原烷基化,用UVS400A真空浓缩仪以转速3000r·min-1离心干燥三小时;
将溴化氰已经饱和溶液去4μL加入胶粒中,再加入百分之七十三氟乙酸,避光4摄氏度放置18小时以上;
加入百分之七十乙腈百分之零点二三氟乙酸水溶液10μL(没过胶粒)提取两次,合并提取液,氮气吹干。
综上所述,就是溴化氰C末端裂解过程。