由于溴化氰用量愈大，被偶联的配体愈多，为保证抗体偶联适当，我们常使琼脂糖微球沉降体积与溴化氰用量之比维持在15—25：1(亳升/克)，亦可根据情况增至50：1；每豪升全抗血清与1毫升沉降体积的琼脂糖微球偶联，使偶联率控制在全抗血洁蛋白的60%左右，在分离IgA，JgM，TgD及淋巴因子时，均获得较满意的结果。

  在制备抗原免疫吸附柱时，偶联率高并不直接影响抗原活性，至多由于空间位阻而影响溴化氰活化琼脂糖微球抗原—抗体复合物的形成，可通过碳化二亚胺等先将琼脂糖微球结合上一个“空间手臂"，与配体偶联来解决。因此偶联抗原时，常可使用纯抗原，琼脂糖微球沉降体积与溴化氰用量之比可降至10：1(毫升/克），每毫升沉降体积的琼脂糖微球一般可与10亳克纯抗原偶联，其吸附相应抗体的效率一般较高。

  溴化氰活化琼脂糖微球抗原—抗体复合物的形成和解离是免疫吸附法进行分离提纯的根据，待纯化物质与配体吸附的条件与一般免疫复合物形成的要求相同。解离的方法有特异的与非特异的两种，我们常采用非特异的解离（即改变洗脱液的离子强度，PH等），对亲和力较强的蛋白质尚可用某些蛋白变性剂如盐酸胍或尿素等进行解离。为了更好地保存洗脱蛋白质的生物活性，我们较多用PH6.1，3M KCNS并与PH 2.8，0.1M甘氨酸—盐酸缓冲液进行了比较：

  3M KCXS的优点是回收率益，峰型集中，不破坏吸附柱，溶液近中性不易导致蛋白变性。缺点是各管洗脱液必须透析除尽KCXS后才能进行洗脱的浓度和纯度鉴定。用PH2.8 0.1M甘氨酸—盐酸缓冲液作为解离剂的优点是回收率高，缺点是对吸附柱的破坏作用较3M KCNS明显，洗脱时出现双峰（图2），第一峰是被吸附的物质，第二峰在pH改变时出现，其中除仍含少量被吸附物外，还有配体蛋白出现，可用溴化氰琼脂双扩散法测出；另外因洗脱液pH 2.8，易导致蛋白变性，蛋白洗脱后必须立即用1M NaHC03中和操作较繁琐。

  以溴化氰活化琼脂糖微球为固相支持物制备免疫吸附剂时，往往存在一定程度的非特异吸附作用。为避免或减少非特异吸附，我们在多种缓冲液中加入0.5M NaCl提高离子强度已如前述，又用含自由基的小分子物质如一乙醇胺、甘氨酸等封闭残留的活化基团，以提高过往样品的回收率。吸附柱使用及再生后，可在缓冲液中0.02%NaN3浸泡或在柱床中充分淋冼，保存于4摄氏度冰箱内活性可保存一年以上。反复使用十余次亦未见活性有明显下降。