通过加人不同量的溴化氰切割包涵体每10mL菌液生成的包涵体用8mol/L尿素溶液(含0.1mol/L HCI)1mL溶解4℃,12000r/min离心15min,上清即为包涵体溶解液。将溴化氰溶于乙腈,配成200mg/mL的溶液(使用时现配),再将溴化氰溶液加入到包涵体溶解液中,每管中溴化氰的摩尔数:Met(甲硫氨酸)的摩尔数分别为50:1,250:1 250:1。
振荡混匀,避光室温裂解24h后,加入1倍体积的ddH2O灭活溴化氰,反应完成后所使用过的器皿均要用硫酸亚铁进行处理,取样进行Tricine—SDS—PAGE电泳分析切割效果。
在不同酸浓度及溶剂条件下切割包涵体每10mL菌液生成的包涵体分别用8mol/L尿素溶液,8mol/L尿素溶液(含0.1mol/L HCI ),8mol/L尿素溶液(含1mol/L HCI),70%甲酸溶解,离心后,加人相同量的溴化氰,按1.3.1项下操作,反应完成后取样进行TriCine—SDS—PAGE电泳。
从电泳结果(如下图)可以看出:
当溴化氰与Met的摩尔数比较低的(50:1)切割效率很低,当比例为250:1时有较高的切割效率,但继续增加比例切割效果没有明显变化。