以用该溴化氰琼脂凝胶FF偶联牛血清白蛋白为例,具体情况如下:
可以取BSA100mg溶解于10毫升的pH9.0.0.25M碳酸钠缓冲液中,然后用天平称量需要的活化填料1克(1克干的活化填料经完全溶胀为4—5毫升)。然后将这1克填料加入溶解后的BSA溶液中混合,在摇床上振荡,25摄氏度溴化氰琼脂凝胶FF偶联6小时。
再加入50mg甘氨酸,再反应6小时封闭剩余的基团。溴化氰琼脂凝胶FF偶联了BSA的填料可以装在柱子中,然后用1升NaCl溶液洗10个柱床体积,收集装柱子的液体以及清洗柱子的溶液测定BSA的总量,再用纯水冲10个柱床体积,最后将填料在20%乙醇溶液中保存。如果是大量的偶联,可以选择G3砂心漏斗或者滤器上按上面的方法清洗,用20倍填料体积,分3—5次清洗。
BSA的偶联量计算方法:BSA的吸附载量N=(G0—G1)N。
G0:BSA总使用量,单位mg
G1:偶联反应后未溴化氰琼脂凝胶FF偶联的BSA的量,单位mg
V:填料的体积,单位:ml
备注:该溴化氰琼脂凝胶FF偶联方法可用于偶联单抗及其它蛋白,均能获得很好的偶联效果。