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时间:[2017/11/1]

   溴化氰公司了解到多肽片段的分离一般较为繁琐,溴化氰裂解片段更是如此。因为溴化氰裂解片段还容易聚合并发生沉淀,使样品丢失,研究人员曾以 Sephodox G5u 柱层析分离。因不完全裂解片段3—6之间分子量相差不大,完全裂解片段7—10之间也相差不大。所以柱层析只能得到两个大峰,且相互重叠,直接以 HPLC 分离,只能纯化少数多肤片段。为了避免因分离操作步骤多而使样品大量损失。

  溴化氰公司发现研究人员直接采用了制备性多肤 SDS-PAGE 分离制备,然后进一步以 HPLC 纯化,最终得到了较满意的效果。虽然本法工作量较大,但不失为一种有效方法。

  鸭 apo A-I 的溴化氰的功能域定位情况为:

  溴化氰公司介绍到鸭 apo A-I 分子中具有广泛的脂质结合区,脂质结合部位分布于该分子的多个区域中。根据文献报道,人及其他动物 apo A-I 脂质结合区域也是分布于分子的多个位点。推侧其机理可能由于在鸭、人或其他动物除C末端的 44 个氨基酸区域外,都存在着多个由 Pro 分隔开的 11 或 22 个氨基酸的内部串联状重复序列。它们都能形成具有明显亲水面和疏水面的双性α-螺旋,这些疏水面可以形成多个与脂质相结合的活性部位。

  鸭 apo A-I 的 LCAT 激活部位于氨基酸64—136之间,该区域中可以形成的双性α—螺旋有66—87,88—98和99—120,它们的疏水性相对较弱,且在88—98的 11 个氨基酸残基中有 8 个是带正负电荷的,这一区域很可能为 apo A—I 的铰链区,在一定条件下可结合于HDL颗粒表面,也可能脱出翻转到 HDL 颗粒表面之外。形成激活 LCAT 的活性中心,但要发挥较强的激活能力,还需要相邻区域提供分子结构上的稳定性,所以只有完整的 apo A—l 和较长的片段才具有较强的激活能力。

  鸭 apo A—I 的溴化氰片段与 HDL 受体结合实验指出:片段3、4和9均可与 HDL 受体结合,而片段5(64—206)和7(1—63)、均不能与 HDL 受体结合,这一结果与文献对人 apo A—l 的报道相似。因此与 HDI 受体结合的区域可能位于 C 末端的氨基酸 207—240之间,该片段含有 33 个氨基酸,它们分别为 TPLVQDFKERLT—PYAENLKTRFISLLDELQKTV—A,其中 12 个为极性。占该片段总数的 36.7%,有 7 个为酸性,5个为碱性。这些极性氨基酸在该片段与 HDL 受体结合中起重要作用,但鸭 apo A-I的溴化氰与 HDL 受体的结合是否还需要其他部位的参与及二者的作用机理,有侍进一步的研究。

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