用溴化氰活化右旋糖酐,对胰岛素进行供价修饰。溴化氰公司关于其具体操作步骤介绍如下:
取一克低分子右旋糖酐,溶于二十毫升零点一升碳酸缓冲液(pH9.0)中,置于冰水浴中,在搅拌下滴加二十毫升百分之五的溴化氰溶液,在整个反应过程滴加四N 氢氧化钠使反应液的pH维持在10.4至10.8范围内,持续反应十分钟,之后将反应液倒入二百毫升冷丙酮中,迅速抽滤得白色沉淀,用冷丙酮充分洗涤沉淀物,获得活化右旋糖酐。用三十毫升冷0.1M碳酸钠缓冲液(pH9.0),溶解上述得到的活化右旋糖酐,搅拌下滴加四毫升百分之一的胰岛素溶液,调反应液pH为9.0,三摄氏度搅拌反应二十四小时。反应液浓缩后上Sephasex G-75凝胶柱(2.2×80cm)于三摄氏度下进行分离,洗脱速度为三十毫升每小时,收集修饰胰岛素部分,冻干。
溴化氰活化右旋糖酐修饰胰岛素的产率为百分之二十至百分之二十五。
溴化氰右旋糖酐修饰胰岛素(D-Ins)和天然胰岛素(Ins)的聚丙烯酰胺胶电泳如上图1。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得修饰胰岛素的分子量为42,000。