溴化氰公司介绍到修饰胰岛素的分子量为42000考虑胰岛素分子量为5700,而修饰剂右旋糖酐的平均分子量为35000,可以推论,胰岛素来右旋糖酐之间的共价偶联分子比是1比1。
溴化氰活化右旋糖酐修饰,要求特异性部位使胰岛素分子上的自由氨基。胰岛素分子中可供偶联的游离氢基共有四个,即A1的Gly,D1的ple,B22的Arg,B29的Lys修饰胰岛素的氨基酸组成分析表明,Lsy含量较天然胰岛素明显偏低,而phe也稍许偏低,推测B29的Lys胰岛素的主要修饰部位,其次是B29的phe。
由于它们直接与修饰剂相联,改变了它的带电性质,因而在氨基酸组成分析时测得的含量较低(见表1)。推测胰岛素与溴化氰活化右旋糖酐之间仅有一处以共价键结合,可能是一个部位结合后,由于空间位阻而影响另一部位结合。当PH9.0时,胰岛素分子上的Arg的胍基,由于质子化而失去了反应能力。A1Gly由于与A4的Giu、As的G/n形成氢键,使其反应活性受到影响。
溴化氰公司发现结构研究证明B1至B4、B29至B30肽键呈舒展状态,不参与氢键的形成。这种舒展结构适合于修饰剂的接近和反应。